分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)及凈化工程裝修要求
實(shí)驗(yàn)室潔凈工程裝修,,實(shí)驗(yàn)室凈化工程設(shè)計(jì)主要是由我國空氣潔凈等級標(biāo)準(zhǔn)分為:100級,、1000級、10000級、100000級等等,。標(biāo)準(zhǔn)則劃分為:1級,、2級,、3級,、4級、5級為準(zhǔn),。
基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室(PCR實(shí)驗(yàn)室):
PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,,并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為了避免各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,,宜采用全送全排是氣流組織形式,。同時(shí),要嚴(yán)格控制送,、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求,。
試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū):
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),,不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),,并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑,。對氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求,。
標(biāo)本制備區(qū):
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存,、核酸(RNA、DNA)提取,、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時(shí)cDNA的合成,。本區(qū)的壓力梯度要求為相對于臨近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)域進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,。另外,,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,,所以應(yīng)避免在本區(qū)域內(nèi)不必要的走動。
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū):
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū):該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為NDA或cDNA擴(kuò)增,。此外,,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,。在巢氏PCR測定中,,通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管。因此巢氏擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性,,第二次加樣必須在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)域漏出,。為避免氣溶膠所致的污染,,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行,。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定,。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區(qū)域可不設(shè),。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于臨近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)域擴(kuò)散至其它區(qū)域,。
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施:
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件,,應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺,、生物安全柜,、離心機(jī)、加樣器等,。
實(shí)驗(yàn)室凈化工程設(shè)計(jì)主要是通過人為的手段,,應(yīng)用潔凈技術(shù)實(shí)現(xiàn)控制室內(nèi)空氣中塵埃、含菌濃度,、溫濕度與壓力,、以達(dá)到所要求的潔凈度、溫濕度和氣流速度等環(huán)境參數(shù),??諝鉂崈舳仁侵笣崈艨諝猸h(huán)境中空氣含塵量程度,空氣潔凈度的級別以含塵濃度劃分,。潔凈度是指每升空氣中所含粒徑≥0.5um的塵粒的總顆粒,。
實(shí)驗(yàn)潔凈室一般實(shí)施兩級隔離,一級隔離通過生物安全柜,、負(fù)壓隔離器,、正壓防護(hù)服,、手套、眼罩等實(shí)現(xiàn);二級隔離通過實(shí)驗(yàn)室的建筑,、空調(diào)凈化和電氣控制系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn),。但由于凈化空調(diào)需要風(fēng)量小為了安全起見,風(fēng)量都按大的估算,,一般都要超過規(guī)范規(guī)定,,物別是百級以上,冷熱負(fù)荷在要求不是很嚴(yán)格的情況可能估算,,現(xiàn)在專門有凈化空調(diào)機(jī)組,,可以直接利用。二級~四級生物安全實(shí)驗(yàn)室應(yīng)實(shí)施兩級隔離,。一般實(shí)驗(yàn)室裝備有:超凈工作臺,、生物安全柜、邊臺或不銹鋼操作臺,、洗滌臺等,。
以PCR實(shí)驗(yàn)室為例(PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)),是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,,也是生物學(xué),、醫(yī)學(xué)臨床等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,,實(shí)驗(yàn)室通常分為四個(gè)區(qū)域,,即:試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū),、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū),、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)(如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當(dāng)合并),。進(jìn)入各個(gè)區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時(shí),,不得將工作服帶出,。
實(shí)驗(yàn)室潔凈裝修,試劑儲存和準(zhǔn)備室(標(biāo)本制備區(qū)),,儀器主要配置有:冷凍離心機(jī),、生物安全柜、冰箱,、可移動紫外燈,、全自動力核酸蛋白純化儀、專用工作服和工作鞋等,。擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)配置有:冰箱,、高速離心機(jī),、超凈工作臺、PCR儀(要求負(fù)壓狀態(tài)),、可移動紫外燈,、微量加樣器、核酸擴(kuò)增儀等,。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)主要配置有:移液器,、振蕩器、超凈工作臺,、毛細(xì)管電泳儀,、冰箱、離心機(jī),、微量加樣器、可移動紫外燈等,。