1微生物實驗室基本設備的質(zhì)控要求

(1）孵箱：根據(jù)需要設置溫度，可調(diào)溫度范圍應由室溫至60℃,。孵箱溫度允許的波動幅度為設置溫度±1℃,，如一般細菌培養(yǎng),，孵箱溫度應為35℃±1℃,。應每天記錄孵箱溫度,，定期加水,，每月清潔內(nèi)壁和架子,。
（2）冰箱和低溫冰箱：普通冰箱允許溫度為4℃±2℃，每天記錄溫度,，并定期清潔,。盡量減少冰箱開啟次數(shù)，減少溫度的波動,。低溫冰箱控制溫度－20℃±5℃,，每天觀察溫度并記錄,，每隔3個月除霜1次,。一旦溫度失控,，及時調(diào)整。

（3）水浴箱：根據(jù)需要設置溫度,，允許的溫度波動幅度為0.5℃,，每日檢查水位，記錄溫度,。每月擦拭箱體內(nèi)部并換水,。

（4）高壓滅菌器：控制溫度121℃，每次使用前觀察并調(diào)整水位,，記錄使用時間,、溫度或壓力。每周用嗜熱芽孢桿菌檢測滅菌效果,，每月清理內(nèi)部及換水,，并定期檢測密封圈的密封效果。

（5）二氧化碳培養(yǎng)設備：常用的有二氧化碳箱和蠟燭罐,，要求二氧化碳濃度為5％～10％,，箱內(nèi)或罐內(nèi)保持濕度，并用淋病奈瑟菌作培養(yǎng)效果監(jiān)測,。

（6）厭氧培養(yǎng)設備：主要有厭氧箱,、厭氧罐、厭氧袋,?；旌蠚怏w組分要求二氧化碳10％、氫氣10％和氮氣80％,。厭氧箱與厭氧罐內(nèi)部要每周清潔,，定期更換催化劑。每次使用培養(yǎng)設備均應用美藍指示劑或銅綠假單胞菌檢測厭氧效果,。
（7）天平：保持刀刃光滑而鋒利,、稱盤清潔，并定期校正,。

（8）pH計：要求誤差不超過0.02,，并定期校正。

（9）顯微鏡：最常用的是光學顯微鏡,，應注意保護油鏡,。每次使用后應用擦鏡紙擦去油鏡頭上的鏡油。每天工作結束后,，應用含少量（或酒精）的擦鏡紙擦拭油鏡,，再用潔凈擦鏡紙擦干,。另外，微生物學實驗室還用到暗視野顯微鏡,、熒光顯微鏡等,，均應按規(guī)程清潔和保養(yǎng)。

（10）玻璃器皿：微生物學實驗室所用試管,、吸管,、平皿等應潔凈無菌，不殘留酸堿,。

（11）接種器具：分為接種針和接種環(huán)兩種,。應選用傳熱散熱快、耐用和不生銹的材料,，早先使用的白金絲由于價格昂貴,，目前多用比較經(jīng)濟的鎳鉻絲代替。一般要求接種環(huán)長5～8cm,、直徑2～4mm,，定量接種環(huán)要定期校正其容量，接種針長5～8cm,。

微生物實驗室設備控制標準保養(yǎng)及監(jiān)測
高壓滅菌器溫度≥121℃每次用前換水,；每月清潔1次。
孵育箱溫度35℃±1℃每天記錄溫度,；每月清潔內(nèi)壁和隔板,。
水浴箱溫度37 ℃±0.5℃每天記錄溫度；每月擦內(nèi)壁和換水,。
冰箱溫度4℃±2℃每天記錄溫度,；保持清潔并定期除霜。
低溫冰箱溫度－20℃±5℃每天記錄溫度,；保持清潔并定期除霜,。
二氧化碳培養(yǎng)箱:二氧化碳5％～10％,每天記錄溫度；定期換水,；用淋病奈瑟菌監(jiān)測效果,。
厭氧培養(yǎng)箱:二氧化碳10％、氫氣10％,、氮氣80％,每次使用時用厭氧指示劑監(jiān)測效果,。
微生物標本采集、運送與處理原則
標本的正確采集,、運送與處理對于細菌的培養(yǎng),、鑒定，有著十分密切的關系。

一,、標本采集
（1）送檢申請單必須惟一標識,，并注樣品名稱、型號,、年月,、性狀、標本來源,、采集時間,、檢驗目的及添加物使用情況等,，以便實驗室能針對該標本選用相應培養(yǎng)基和適宜培養(yǎng)環(huán)境,，有利于對檢驗結果的綜合評估。
（2）為避免漏檢,，確保病原體的檢出,，應盡量在抗菌藥劑使用前采集標本。
（3）標本采集時應嚴格執(zhí)行無菌操作,，減少或避免機體正常菌群及其他雜菌污染,。
（4）以棉拭子采集標本，如拭子,，應插入運送培養(yǎng)基送檢,。
（5）混有正常菌群的標本，如拭子,，不可置肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢,。
（6）盛標本容器須經(jīng)滅菌處理，但不得使用消毒劑,。
（7）實驗室應制定各種送檢標本的采集,、運送、保存等正確方法和注意事項,，并應向取樣者詳細介紹如何正確留取和送檢標本,。

二、標本運送
標本采集后應立即送至微生物學實驗室,。標本采集后在室溫下超過2h未送達實驗室者可視為不合格標本,。生產(chǎn)線邊檢驗可提高病原菌檢出率，送檢標本必須與檢驗申請單有相同的惟一標識,。

三,、標本驗收
實驗室只能接收和處理合格的檢驗標本，因此應制定不合格標本拒收標準,；對不合格標本應注明原因,，退回，并做記錄,。
四,、標本處理
（1）實驗室收到標本后,，應立即根據(jù)標類型及檢驗目的，選擇合適的培養(yǎng)基接種,。

（2）混有正常菌群的標本,，應作定量細菌培養(yǎng)。不能精確定量或常規(guī)定量操作較困難的標本,，分離出致病菌及條件致病菌為優(yōu)勢菌時,，應作細菌鑒定及藥敏試驗，同時注明細菌量化指標,。

（3）對已用抗菌藥物治療的標本,，可在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)以中和藥物對細菌的抑制作用。
微生物檢驗標本的采集
樣品在使用抗生素前,，將標本采集在無菌容器內(nèi),，立即送到檢驗科細菌室，特殊檢驗應先與細菌室聯(lián)系,，再按要求采集標本,，并立即送檢。

（一）樣品的采集：
1.憑檢驗申請單到檢驗科領取血培養(yǎng)瓶,。
2.采取樣品部位和血培養(yǎng)瓶口應嚴格消毒,。
3.通常一般至少作三次血培養(yǎng)，在抗菌藥已實施者,，更應增加培養(yǎng)次數(shù),，懷疑特定菌種一般應一日作三次培養(yǎng)，必要時需追加次數(shù),。
4.應在生產(chǎn)高峰時采集,。
5.對疑為細菌性污染的產(chǎn)品，嚴格消毒后抽取2～3 ml作增菌培養(yǎng),。
6.每次采樣量5-10ml,，培養(yǎng)基與樣品之比以10∶1為宜，以稀釋樣品中的菌物質(zhì),。
7.采樣過程應嚴格無菌操作,，避免污染。

微生物實驗室培養(yǎng)基質(zhì)量控制
一,、配制時的質(zhì)量控制
（1）容器：配制和分裝培養(yǎng)基的燒瓶,、平皿或試管等器材應為中性，無酸,、堿抑制物殘留,，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗結果,。

（2）成分來源：各種成分來源可靠,，不含對目的菌生長有抑制的物質(zhì)。特殊要求的培養(yǎng)基,，如葡萄糖氧化發(fā)酵試驗（O／F 試驗）,，除加入葡萄糖外，不能含有其他糖類,，指示劑不能用乙醇溶液,，避免O／F試驗的假陽性。培養(yǎng)基配制用水應是蒸餾水,。

（3）pH值調(diào)整：根據(jù)培養(yǎng)基的不同要求調(diào)整pH 值,，控制在要求范圍的±0.2之內(nèi)。應當注意,，培養(yǎng)基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1～0.2,，故矯正時應比實際需要p H值高0.1～0.2。

（4）滅菌：根據(jù)培養(yǎng)基所含成分及配制數(shù)量的不同,，選擇不同的滅菌方式，既要達到滅菌效果,，又不破壞培養(yǎng)基成分,。一般對穩(wěn)定的培養(yǎng)基，如MH瓊脂,、營養(yǎng)瓊脂可用高壓滅菌,，即121℃15min ；而含糖的培養(yǎng)基則以108℃滅菌為好,，以防止糖類破壞,。不耐高熱的物質(zhì)如血清、牛乳等,，可采用間隙滅菌法滅菌,。

（5）分裝：根據(jù)使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養(yǎng)基所用的平皿,、試管要求清潔,，不殘留酸堿；制備平板培養(yǎng)基時,，操作臺要水平,，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時確保無菌操作,。

二,、配制后質(zhì)量控制
（1）培養(yǎng)基外觀情況：包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固,。如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面有裂紋或與培養(yǎng)皿的邊緣分離,，說明培養(yǎng)基有脫水現(xiàn)象，必須丟棄,。

（2）無菌試驗：每一批配好的培養(yǎng)基均須進行無菌試驗,。先滅菌后分裝的培養(yǎng)基，可采用抽樣方法試驗,，少于100個樣本通常選取5％～10％的量,，如果配制大量培養(yǎng)基，則任意選取10個培養(yǎng)基,；無菌分裝培養(yǎng)基則需全部做無菌試驗,。樣本在35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養(yǎng)，如培養(yǎng)基含有血液,，則需再置于室溫1天,，以檢查嗜冷菌。選擇性培養(yǎng)基因含有抑制物質(zhì),，能抑制許多微生物,，因此，可加入10倍量的無菌液體培養(yǎng)基,，稀釋抑制物質(zhì),，以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗,，接種時,，也要檢查每個平板上的可見菌落。

（3）性能測試：每一批新制或新購的培養(yǎng)基,，使用前均須取已知性質(zhì)的庫存菌種進行性能測試,。培養(yǎng)基按目的不同可分為增菌培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基,。

①增菌培養(yǎng)基：接種少量難以生長的細菌,，在一定時間內(nèi)觀察增菌情況，細菌能生長的最小接種濃度越小,，說明增菌培養(yǎng)基性能愈好,。

②分離培養(yǎng)基：要求目的菌生長良好，非目的菌被抑制,。一般要求生長的目的菌接種量不可過多,，較好的方法是將測試菌調(diào)成0．5麥氏濁度的菌懸液，再用0.001ml的標準接種環(huán)涂劃在培養(yǎng)基上,，觀察菌落生長,。
③鑒定培養(yǎng)基：應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗,。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌,、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌3種菌分別接種3支培養(yǎng)基,，若反應結果為斜面產(chǎn)酸／高層產(chǎn)酸、硫化氫陽性,，斜面產(chǎn)堿／高層產(chǎn)酸,，斜面產(chǎn)堿／高層產(chǎn)堿，質(zhì)量才算合格,。
試劑,、染色液和血清質(zhì)量控制

一、試劑
各種試劑配好后,，均應注明試劑名稱,、配制日期、有效期及配制者,，并作記錄,，商品試劑亦應注明購入日期及有效期。配制好的試劑均應用標準菌株作性能測試,，不合格者不能使用,。性能測試間隔可根據(jù)試劑的穩(wěn)定性和使用頻率而定，如氧化酶試劑每天用前測試,，靛基質(zhì)試劑每周測試1 次,。試劑須根據(jù)不同要求作適當?shù)馁A存，如氧化酶試劑應置棕色瓶中4 ℃冰箱保存,。

二、染色液
常用染色液如革蘭染色液在每次配制后并常規(guī)至少每周檢測1次,，用標準菌株金黃色葡萄球菌（ATCC25923）和大腸埃希菌（ATCC 25922）作陽性和陰性檢測,。不常用染色液（如鞭毛染色液）應于每次使用前，用已知特征的菌株作檢測,。
3.診斷血清
診斷血清的使用和保存必須按說明要求執(zhí)行,，一般置4℃冰箱貯存，且不得暴露室溫過久,；使用前應注意有效期及效價,，第一次使用抗血清時應用相應的菌株檢查其有效性，以后每月檢測1次,。如抗血清出現(xiàn)任何顏色的改變或混濁,，即不能使用。

微生物實驗室檢驗標本及檢驗結果質(zhì)量控制
一,、微生物檢驗標本質(zhì)量控制
正確采集和處理標本是實驗室檢查獲得正確結果的前提,，目前仍有不少實驗室和檢驗人員對檢驗標本分析前質(zhì)量控制的重視不夠,。對標本采集方法和時間、標本來源,，實驗室人員雖然不能直接控制,，但有責任人員正確采集標本，可采取集中講課,、個別輔導作取標本示教等方式給予指導,。同時控制影響檢驗質(zhì)量的其他因素，如檢驗標本的運送,、儲存和處理等,，均應統(tǒng)一按正確的操作規(guī)程執(zhí)行。